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小鼠精原gan细胞分离富集和培养

成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02～0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清终止消化,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(P>0.1),CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度

自噬流检测

自噬是调节真核细鹏生长、和能量代谢的重要生物学机制。细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的话化。大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性疾病，特别是、神经退行性疾病及组织纤维化的发病密切相关，目前对于自噬液的检别是自噬与其相关疾病研究领域的热点。由于自噬流是一个曲多个步骤组成的动态过程。因此往需要精细的突验才能准确判断自啦流状态。观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。

血管生成技术

一、服务介绍

zhong瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。由于zhong瘤组织这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种微血管容易发生渗漏，因此肿liu细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。25克胰酶蛋白酶(活力为1:250)，加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank's液溶解，滤器过滤chu菌，4°C保存,用前可在379C下回温。

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的mao细血管和毛xi血管后微静脉新的mao细血管性血管的生长。无论原发性zhong瘤还是继发性zhong瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于zhongt瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。实验流程：慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定结果示例：图A病毒滴度检测。